Cytoskeletal Signaling
| CSTコード |
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| #2281S | 100 μL | 46,000 | |
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2281 の推奨プロトコール
最適な結果を得るために：Cell Signaling Technology (CST) 社は、各製品の推奨プロトコールを使用することを強くお薦めいたします。
推奨プロトコールはCST社内試験の徹底的なバリデーションに基づいて作成されておりますので、正確かつ再現性の高い結果が得られます。
注：各製品に最適化されたプロトコールをリンクしています。
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2281:
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Immunofluorescence
Western Blotting
| 用途 (希釈倍率) | |
| ウェスタンブロッティング (1:1,000)、免疫蛍光染色 (IF-Ｆ) (1:50) |
| 特異性・感度 | |
| 内在性レベルのSPAKタンパク質を検出します。OSR1 や他のGCK ファミリーメンバーとは交差しません。 |
| 使用抗原 | |
| ヒトのSPAK タンパク質のSer436 周辺領域 (合成ペプチド) |
Western Blotting
Western blot analysis of extracts from 293, C2C12 and NBT-II cells, using SPAK Antibody.
IF-F
Confocal immunofluorescent analysis of choroid plexus epithelial cells showing apical membrane localization, using SPAK Antibody (red). Blue pseudocolor = DRAQ5® #4084 (fluorescent DNA dye).
SPAK (STE20/SPS1-related Pro/Ala-rich kinase) and OSR1 (oxidative stress responsive 1) are members of the GCK family serine/threonine kinases. Overexpression and in vitro studies demonstrate that SPAK is able to activate p38 MAP kinase indicating a possible role for SPAK in the stress response (1). Yeast two-hybrid screening revealed that SPAK and OSR1 bind to Na-K-2Cl cotransporters NKCC1 and NKCC2 and K-Cl cotransporter KCC3 (2). WNK1 and WNK4 phosphorylate SPAK at Thr243/247 and Ser380 (3-5). Similarly, WNK1 and WNK4 phosphorylate OSR1 at Thr185 and Ser315 (3, 4). Phosphorylation at these sites stimulates SPAK and OSR1 activity, leading to NKCC1 phosphorylation and enhanced NKCC1 activity (3-5). SPAK is also phosphorylated at Ser311 by PKCθ in response to T cell activation. Substitution of Ser311 with Ala or specific siRNA knock-down of SPAK dramatically reduces TCR/CD28-induced AP-1 activation, suggesting SPAK is involved in T cell signaling as well (6).
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Johnston, A.M. et al. (2000) Oncogene 19, 4290-4297.
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Piechotta, K. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277, 50812-50819.
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Vitari, A.C. et al. (2005) Biochem. J. 391, 17-24.
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Moriguchi, T. et al. (2005) J. Biol. Chem. 280, 42685-42693.
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Gagnon, K.B. et al. (2006) Mol. Cell. Biol. 26, 689-698.
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Li, Y. et al. (2004) EMBO J. 23, 1112-1122.
PhosphoSitePlus®：
