PI3K / Akt Signaling

PathScan® Signaling Nodes Multiplex IF Kit

 イイネ！(0) PathScan® Signaling Nodes Multiplex IF Kit Data Sheet PDF
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2012年2月8日11時35分 現在
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#8999S1 Kit147,000
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Signaling Nodes抗体製品一覧

8999 の推奨プロトコール i

最適な結果を得るために：Cell Signaling Technology (CST) 社は、各製品の推奨プロトコールを使用することを強くお薦めいたします。
推奨プロトコールはCST社内試験の徹底的なバリデーションに基づいて作成されておりますので、正確かつ再現性の高い結果が得られます。

注：各製品に最適化されたプロトコールをリンクしています。

 
Products Included Product No. 容量 Applicaton 希釈率 種交差性
Primary Cocktail 8998 100 µl IF-IC 1:100 H, M, R, Mk
Detection Cocktail 8997 100 µl IF-IC 1:100 N/A
Kit Analytes Detection Dye Ex(max) (nm) Em(max) (nm)
Phospho-Akt (Ser473) Alexa Fluor® 555 555 565
Phospho-p44/42 Erk1/2 (Thr202/Tyr204) Alexa Fluor® 488 495 519
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) Alexa Fluor® 647 650 665
Kit 情報
自動イメージング、レーザースキャニングハイコンテントプラットフォーム、あるいは手動の免疫蛍光染色用顕微鏡を用い、重要なパスウェイを介するシグナル伝達を同時に評価できる、斬新なマルチプレックスアッセイが可能です。キットには、100アッセイ分の3種類の一次抗体のカクテルとその検出に最適化されたAlexa Fluor®カクテルが含まれています。
種交差性
ヒト、マウス、ラット、サル
特異性・感度
一次抗体のカクテルには、phospho-Akt (Ser473)、phospho-p44/42 (Thr202/Tyr204)、phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) 抗体が含まれます。phospho-Akt (Ser473) 抗体は内在性レベルのSer473 がリン酸化されたAkt タンパク質を検出し、phospho-p44/42 (Thr202/Tyr204) 抗体は内在性レベルのThr202 とTyr204 の両方がリン酸化されたp44 MAPK (Erk1) およびThr185 とTyr187 の両方がリン酸化されたp42 MAPK (Erk2)タンパク質を検出します。また、Thr202 だけがリン酸化されても検出しますが、同様の部位がリン酸化されたJNK/SAPK やp38 MAPK タンパク質とは交差しません。phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) 抗体は、内在性レベルのSer235 とSer236 がリン酸化されたS6 Ribosomal Protein を検出します。
貯法
-20℃
Alexa Fluor®は、Molecular Probes, Inc. の登録商標です。
社内データ

IF-IC

IF-IC

Immunofluorescent analysis of MCF7 cells, serum-starved (left) or insulin-treated (right), using PathScan® Signaling Nodes Multiplex IF Kit. Red = Phospho-Akt (Ser473), green = Phospho-p44/42 (Thr202/Tyr204), and blue pseudocolor = Phospho-S6 (Ser235/236).

IF-IC

IF-IC

Immunofluorescent analysis of insulin-treated MCF7 cells (human breast adenocarcinoma), following pretreatment with kinase specific inhibitors LY294002 (PI3 Kinase Inhibitor) #9901 or U0126 (MEK1/2 Inhibitor) #9903 for the indicated times.

バックグラウンド

Akt, also referred to as PKB or Rac, plays a critical role in controlling the balance between survival and apoptosis (1-3). This protein kinase is a downstream effector of phosphoinositide-3 kinase (PI3K), and is activated by phospholipid binding and activation loop phosphorylation at Thr308 by PDK1 (4), as well as by phosphorylation within the carboxy terminus at Ser473 by the mTOR-rictor complex (TORC2) (5). This pathway is down-regulated following dephosphorylation of phosphatidyl-inositol 3,4,5 triphosphate by PTEN, as well as by deactivation of PI3K with targeted small molecule inhibitors such as wortmannin and LY294002 (2,3,6,7).

p70 S6 kinase, a mitogen activated Ser/Thr protein kinase downstream of PI3K and the mTOR-raptor complex (mTORC1), phosphorylates the S6 protein of the 40S ribosomal subunit leading to an increase in translation of mRNA transcripts that contain an oligopyrimidine tract in their 5’ untranslated region (8). These particular mRNA transcripts (5’TOP) encode proteins involved in cell cycle progression, as well as ribosomal proteins and elongation factors necessary for translation (8,9). Important S6 ribosomal protein phosphorylation sites include several residues (Ser235, Ser236, Ser240 and Ser244) located within a small, carboxy-terminal region of the S6 protein (10,11).

Both p44 and p42 mitogen-activated protein (MAP) kinases (Erk1 and Erk2, respectively) play a critical role in the regulation of cell growth and differentiation (12-15). MAP kinases are activated by a wide variety of extracellular signals including growth and neurotrophic factors, cytokines, hormones, and neurotransmitters. Activation of MAP kinases occur through phosphorylation of Thr202/Tyr204 on human Erk1 and Thr185/Tyr187 on human Erk2 at the sequence T*EY* by a pair of upstream MAP kinase kinases (MEK1/2) (16,17). Erk proteins are negatively regulated by a family of dual specificity (Thr/Tyr) MAPK phosphatases, known as DUSPs or MKPs (18), along with MEK inhibitors such as U0126 and PD98059. Erk dependent phosphorylation of TSC2 at Ser663 leads to the functional inactivation of the TSC1/TSC2 inhibitory complex, and subsequent downstream activation of S6 ribosomal protein through the mTORC1/p70 S6K signaling cascade (19).

  1. Franke, T.F. et al. (1997) Cell 88, 435-7.
  2. Burgering, B.M. and Coffer, P.J. (1995) Nature 376, 599-602.
  3. Franke, T.F. et al. (1995) Cell 81, 727-36.
  4. Alessi, D.R. et al. (1996) EMBO J 15, 6541-51.
  5. Sarbassov, D.D. et al. (2005) Science 307, 1098-101.
  6. Myers, M.P. et al. (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95, 13513-8.
  7. Vlahos, C.J. et al. (1994) J Biol Chem 269, 5241-8.
  8. Peterson, R.T. and Schreiber, S.L. (1998) Curr Biol 8, R248-50.
  9. Jefferies, H.B. et al. (1997) EMBO J 16, 3693-704.
  10. Ferrari, S. et al. (1991) J Biol Chem 266, 22770-5.
  11. Flotow, H. and Thomas, G. (1992) J Biol Chem 267, 3074-8.
  12. Marshall, C.J. (1995) Cell 80, 179-85.
  13. Hunter, T. (1995) Cell 80, 225-36.
  14. Hill, C.S. and Treisman, R. (1995) Cell 80, 199-211.
  15. Cowley, S. et al. (1994) Cell 77, 841-52.
  16. Sturgill, T.W. et al. (1988) Nature 334, 715-8.
  17. Payne, D.M. et al. (1991) EMBO J 10, 885-92.
  18. Owens, D.M. and Keyse, S.M. (2007) Oncogene 26, 3203-13.
  19. Ma, L. et al. (2005) Cell 121, 179-93.
使用例
製品をご使用いただいて研究を発表されましたら、ぜひお知らせください。
 
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本製品は試験研究用です。

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