ウェスタンブロッティング　テクニカルサポート

最良の結果を得るために、各製品の推奨プロトコールを使用することを強くお薦めいたします。

推奨プロトコールは社内試験の徹底的なバリデーションに基づいて作成され、各製品の性能を最大限引き出すことができます。
また、正確かつ再現性の高い結果が得られます。

※ 同じアプリケーションでも製品により推奨プロトコールが異なることがございます。
各製品専用の推奨プロトコールは、必ず製品ページの推奨プロトコール欄よりご確認ください。


ウェスタンブロッティングに関する技術的お問合せの際は、下記テクニカルサポートフォームをご利用ください。
より良いサポートを迅速にご提供するために、できる限り詳細な実験プロトコールをご記入くださいますようお願いいたします。

テクニカルサポートフォームをご利用の前に、Western Immunoblotting Troubleshooting Guide をご参照ください。

※は必須項目です。

一次抗体について

  1. コード番号※：   (例) 4060
  2. バイアル記載のLot No.※：   (例) 1
  3. バイアル記載のReference Date※：   (例) 07/2008
  4. 購入日と購入代理店：   (例) 07/2008　◯◯株式会社
  5. 保存温度※： 4℃  -20℃  -80℃  その他
  6. 小分け保存しましたか?※： Yes  No

サンプルについて

  1. 細胞※： Cell Line  Primary Cells  Whole Tissue  その他
  2. 種※： Human  Mouse  Rat  その他
  3. 処理薬物：   (例) EGF
  4. 処理薬物の濃度：   (例) 5 mM
  5. 薬物の処理時間：   (例) 1, 3, 5 min
  6. ポジディブコントロール：   (例) Jurkat (Calyculin A処理)
  7. 可溶化バッファー：
     SDS Sample Buffer  CST Cell Lysis Buffer  CST Chaps Buffer
     RIPA Buffer  その他
  8. 可溶化バッファーに添加したフォスファターゼ阻害剤 (あれば)：   (例) NaF
  9. サンプルは超音波処理しましたか?※：Yes No
  10. アプライしたタンパク量 (ug/lane)※： 20μg  その他
  11. ライセートを調製してからの期間：   (例) 2 weeks
  12. ライセートの保存温度： 4℃  -20℃  -80℃  その他

プロトコールについて

  1. アクリルアミドゲルの濃度 (%)：   (例) 10%
  2. 転写膜： Nitrocellulose  PVDF  Nylon  その他
  3. 転写膜のポアサイズ：   (例) 0.45 μm

ブロッキングについて

  1. ブロッキングバッファーの組成※：   (例) 5% Nonfat dry milk/ TBST
  2. ブロッキングの時間：   (例) 室温/ 1hr

一次抗体反応について

  1. 一次抗体の由来： Rabbit  Mouse  その他
  2. 一次抗体の希釈率※：   (例) 1:1000
  3. 一次抗体の希釈バッファーの組成※：   (例) 5% Nonfat dry milk/ TBST
  4. 一次抗体の反応時間と反応温度※： 温度/時間   (例) 4℃/ 一晩
  5. 洗浄バッファーの組成と一次抗体反応後の洗浄時間※： 洗浄バッファー/ 時間    (例) TBST/ 5 min×3

二次抗体反応について

  1. 二次抗体の由来※： 由来/ メーカー    (例) goat-anti rabbit IgG/ CST
  2. 二次抗体の希釈率※：   (例) 1:2000
  3. 二次抗体の希釈バッファーの組成※：   (例) 5% Nonfat dry milk/ TBST
  4. 二次抗体の反応時間と反応温度※： 温度/時間   (例) 室温/ 1 hr
  5. 洗浄バッファーの組成と二次抗体反応後の洗浄時間※： 洗浄バッファー/ 時間    (例) TBST/ 5 min×3

検出について

  1. 検出システム※： HRP  AP  その他
  2. 検出システムの製造元メーカー名： 
  3. フィルム露光時間※：   (例) 10 sec

問題点

結果※： 特異的バンドが検出されない  非特異バンドが検出される  バンドが検出されない  その他
結果の詳細をご記入ください。

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