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品質管理 - フローサイトメトリー (F)

フローサイトメトリーは、高感度で定量化でき、かつ素早い多角的解析法です。たとえ亜集団が小さくても、タンパク質発現、DNA含量、細胞周期、細胞の大きさ、散乱光の特性、イオン濃度に関して大量の細胞を短時間で解析できます。加えて、最新のフローサイトメーターでは同時に5種類以上の蛍光マーカーの強度を測定できます。このことはサンプル細胞の量が限られる場合に重要です。フローサイトメトリーと高品質のCST抗体を組み合わせることにより、細胞株や解離させた組織、吸引・血液標本の複雑なシグナル伝達経路を分析することができます。CSTは、蛍光色素で標識した抗体を含め550種以上のフローサイトメトリー用の抗体全てに、徹底的な社内試験による特異性の確認と希釈率の最適化をしています。

社内試験の項目

  • 最適希釈率を決定するために、様々な希釈率で試験
  • アイソタイプコントロールとの比較により、一次抗体の非特異結合を判断
  • 既知のポジティブ/ネガティブ細胞株を用いて特異性を確認
  • パスウェイ特異的な阻害剤や活性化剤処理により、特異性を確認
  • ブロッキングペプチド、siRNA、発現ベクターを用い、染色の特異性を確認
  • フォスファターゼ処理を行い、抗体のリン酸化特異性を確認
  • ロット間の比較試験を行い再現性を確保
  • 推奨プロトコールと最適条件を決定

Titration

Titration of BrdU (Bu20a) Mouse mAb #5292.

BrdU (Bu20a) Mouse mAb #5292: Flow cytometric analysis of Jurkat cells, unincorporated (red) or after 30 minutes of BrdU incorporation (blue), using serial dilutions of #5292. The fold-induction ratio is shown in green. Optimal concentration of #5292 was determined to be 0.044 µg/ml.

Isotype Control

Isotype Control Example for #3900.

Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900: Flow cytometric analysis of SH-SY5Y cells using CREB (D76D11) Rabbit mAb Antibody #4820 (blue) compared to concentration matched #3900 (red).

Activation-state Specificity

Activation-state Specificity Example for #4324.

Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4324: Flow cytometric analysis of human whole blood, untreated (red) or treated with Human Granulocyte Colony Stimulating Factor (hG-CSF) #8930 (blue), using #4324.

Inhibitor Treatment

Inhibitor Treatment Example for #4344.

Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4344: Flow cytometric analysis of Jurkat cells treated with U0126 #9903 (blue) or TPA #4174 (green), using #4344.

Positive and Negative Cell Lines

Positive and Negative Cell Lines Examples for #2707.

Zap-70 (136F12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #2707: Flow cytometric analysis (A) of Ramos B (blue) and Jurkat T (green) cells using #2707. Two-color flow cytometric analysis (B) of a mixed population of T and B cells (Jurkat and Ramos, respectively) using Zap-70 Antibody and a CD3 antibody. CD3-negative B cells have little or no Zap-70 staining, while CD3-positive T cells stain brightly for Zap-70 protein.

品質管理 - フローサイトメトリー (F)