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品質管理 - ウェスタンブロッティング (W)

ウェスタンブロッティングは、細胞や組織中のタンパク質発現の観察に最も用いられる科学手法の一つです。ウェスタンブロッティングの正確さは、免疫ブロット法で用いる一次抗体の品質に大きく依存します。CSTは、ウェスタンブロッティングで利用可能な高品質の一次抗体と二次抗体をご提供しています。CST抗体は社内で開発・製造され、CSTは厳格な品質管理基準に基づいた広範にわたる社内試験を実施しています。

社内試験の項目

  • いくつかの発現レベル既知の細胞株や組織を試験することで、正確な種交差性と特異性を確認
  • タンパク質の発現を誘導または阻害するために成長因子や化学活性化剤、阻害剤で細胞株を処理して特異性を確認、また、フォスファターゼ処理によりリン酸化特異性を確認
  • RNA干渉やノックアウト細胞株を用いて特異性を確認
  • ロット間比較による一貫性の確認
  • お客様の貴重なお時間や試薬の無駄を省くため、最適な希釈率とバッファーを決定し、ポジティブ及びネガティブコントロールを定め、プロトコールを細部まで最適化

siRNA Knock-down

siRNA transfection or knockout with Bcl-xL #6362 and #6363.

Western blot analysis of extracts from HeLa cells, transfected with 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-), SignalSilence® BcL-xL siRNA I #6362 (+) or SignalSilence® Bcl-xL siRNA II #6363 (+), using Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb #2764 (upper) or α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 (lower). The Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb confirms silencing of Bcl-xL expression, while the α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb is used as a loading control.

Phosphatase and Activator Treatment

Western blot analysis of extracts from 293, NIH/3T3, and C6 cells.

Western blot analysis of extracts from 293, NIH/3T3, and C6 cells, treated with λ phosphatase or TPA #4174 as indicated, using Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370 (upper), or p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695 (lower).

Analysis of Multiple Cell Lines

Analysis of Multiple Cell Lines with JIP4/SPAG9 (D72F4) XP Rabbit mAb #5519.

Western blot analysis of extracts from various tissues and cell lines using JIP4/SPAG9 (D72F4) XP® Rabbit mAb #5519.

Lot-to-Lot Testing

Side-by-side comparison of lots for Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP Rabbit mAb #9145.

Western blot analysis of HeLa cells, untreated or treated with IFN-α, comparing lots 1, 2, 3 and 8 of Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb #9145. Note: Signal remains consistent from lot to lot. (Recommended dilution for western blot was changed to 1:2000 with release of lot 3.)

Optimization

Optimal dilutions and buffers are predetermined for Western blot analysis.

Western blot analysis of EGF Receptor Control Cell Extracts #5634 using Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb #3777 (upper) and EGF Receptor (D38B1) XP® Rabbit mAb #4267 (lower).

品質管理 - ウェスタンブロッティング (W)